Как долго можно использовать открытый флакон со средой без потери ее свойств ?

Что произойдет со средой, если использовать один флакон несколько недель?

Испарение неизбежно при работе со средами, но есть способы свести его к минимуму.

Испарение зависит от температуры, но также происходит и во время хранения в холодильнике. Каждый раз, когда мы открываем флакон и извлекаем среду, меняется атмосфера в бутылке, а также – соотношение между средой и воздухом, что приводит к увеличению испарения.

Повторное открытие флаконов в сочетании с хранением при комнатной температуре приводит к постепенному увеличению испарения среды. Это влияет на осмоляльность, и в конечном итоге она выходит за пределы спецификации. Следовательно, рекомендуется минимизировать время нахождения флакона при комнатной температуре и периода, пока он остается открытым.

Испарение влияет на аминокислоты и аммоний

Хранение бутылок со средами вне холодильника приводит не только к увеличению осмоляльности. Также снижается концентрация аминокислот и повышается уровень аммония. Кроме того, чтобы избежать бактериального заражения, крайне важно использовать асептическую технику при использовании одного и того же флакона в течение нескольких дней.

Как уменьшить испарение?

Для этого существует два простых способа:

- Готовьте чашки сразу после извлечения флакона из холодильника.

- Не оставляйте флакон при комнатной температуре, чтобы согреть перед использованием.

Как долго можно использовать открытый флакон без потери свойств среды?

Vitrolife провел исследования стабильности сред* после повторного использования открытых флаконов. Согласно этим исследованиям, безопасно использовать флакон (10-125 мл) среды Vitrolife в течение двух недель после первого открытия (при условии, что вы работаете в соответствии с тем, что описано выше).

Таким образом, быстро подготавливайте чашки к работе. Чашки нужно готовить одну за другой, а капли среды покрывать маслом как можно скорее, чтобы избежать дальнейшего испарения. Минимизируйте воздействие комнатной температуры на флакон и не оставляйте его открытым. Верните флакон в холодильник, как только чашки будут готовы.

Важно и то, сколько раз вы открываете флакон в течение двух недель и сколько раз в день. По возможности планируйте свою работу так, чтобы не нужно было доставать флаконы из холодильника чаще, чем раз в день.

Я не использовал флакон в течение двух недель и не хочу его выбрасывать. Могу ли я аликвотировать среду?

В первую очередь следует отметить, что аликвотирование проводится по собственной инициативе клиники и под ее ответственность. Это может быть сделано по нескольким причинам, и упомянутая выше – одна из них. Другой распространенной причиной является то, что многие клиники используют аликвотирование для экономии времени во время загруженных рабочих дней. Например, обычная практика – готовить пробирки со средой для подготовки спермы только один раз в неделю.

Есть некоторые риски при аликвотировании. Во-первых, существует очевидный риск контаминации. Во-вторых, рост испарения и осмоляльности при заборе среды пипеткой и хранении малого объема среды в емкости, содержащей большой объем воздуха. Заполняйте емкости для хранения до самого верха, чтобы уменьшить количество воздуха внутри, и плотно закрывайте крышку.

Важность использования нетоксичных расходных материалов

Тем не менее, наиболее серьезный риск при аликвотировании представляют собой чашки, которые вы будете использовать. Конечно, заманчиво использовать емкости и пробирки, которые уже есть в вашей лаборатории, но проверены ли они MEA-тестированием? Большинство лабораторной посуды на рынке производится не для целей ЭКО и не тестируется соответственно. Материалы могут содержать токсичные для эмбрионов молекулы, которые попадут в среду для культивирования эмбрионов и нарушат их развитие1. Можно легко определить партии с высоким уровнем токсичности, используя, например, анализ выживаемости сперматозоидов2, 3, но непроверенное лабораторное оборудование может содержать низкую концентрацию токсичных веществ, которые могут оставаться незамеченными в течение длительного периода времени4. Вы можете заметить, что ЧНБ несколько снижается со временем, или что вы не можете улучшить результаты, как ожидалось, при внедрении новых протоколов или оборудования. Потребуется много времени, чтобы выяснить, что причиной является емкость, используемая для аликвотирования среды.

Сегодня существуют продукты, разработанные и протестированные специально для применения в ЭКО. Расходные материалы Vitrolife безопасны для аликвотирования сред.

* Пожалуйста, проверьте этикетку флакона перед использованием продукта. Если среду можно использовать повторно, вы найдете этот символ на этикетке ②.

Ссылки:

1. Nijs et al.Reprotoxicity of intrauterine insemination and in vitro fertilization-embryo transfer disposables and products: a 4-year survey.Fertil Steril; 2009. 92(2): 527-35.

2. Hossain et al; Human sperm bioassay for reprotoxicity testing in embryo culture media: some practical considerations in reducing the assay time. Adv Urol. 2010; doi: 10.1155/2010/136898.

3. Critchlow, J. D., et al. Quality control in an in-vitro fertilization laboratory: use of human sperm survival studies. Hum Reprod 1989. 4(5): 545-549.

4. Van den Bergh et al. Randomized autocontrolled comparison of the embryo culture performance of Nunc and Falcon petri dishes. J of Ass Reprod & Genet; 1999: 16(6): 306-9.